Застосування флуоресцентної мікроскопії

Ідентифікуйте структури в фіксованих і живих біологічних зразках.
Флуоресцентна мікроскопіясьогодні є поширеним інструментом у наукових дослідженнях про життя, оскільки він дозволяє використовувати багатокольорове фарбування, мічення внутрішньоклітинних структур і вимірювання фізіологічного стану клітин.
Переваги флуоресцентної мікроскопії
Флуоресцентна мікроскопія є найпопулярнішим методом для вивчення динамічної поведінки, що виявляється на зображенні живих клітин.
Це пов’язано з його здатністю розділяти окремі білки з високою специфічністю в нефлуоресцентних матеріалах.
Чутливість досить висока, щоб виявити до 50 молекул на кубічний мікрон.
Різні молекули тепер можна фарбувати різними кольорами, що дозволяє відстежувати декілька типів молекул одночасно.
Поєднання цих факторів дає флуоресцентній мікроскопії явні переваги перед іншими методами оптичної візуалізації як для візуалізації in vitro, так і in vivo.
Обмеження флуоресцентної мікроскопії
Флуорофори втрачають здатність флуоресцувати під час освітлення в процесі, який називається «фотовідбілювання». Фотовідбілювання відбувається, коли флуоресцентні молекули накопичують хімічні пошкодження внаслідок накопичення електронів, збуджених під час процесу флуоресценції.
Клітини чутливі до фототоксичних ефектів, особливо короткохвильового світла. Крім того, флуоресцентні молекули схильні виробляти реакційноздатні хімічні речовини під дією світла, тим самим посилюючи фототоксичні ефекти.
На відміну від методів трансмісійної та відбивної мікроскопії, флуоресцентна мікроскопія може спостерігати лише специфічні структури, позначені флуоресценцією.