Більшість клітинних компонентів безбарвні, і їх неможливо чітко розрізнити під мікроскопом. Основною передумовою флуоресцентної мікроскопії є фарбування компонентів барвниками.
Флуоресцентні барвники, також відомі як флуорофори або флуоресцентні барвники, — це молекули, які поглинають світло збудження певної довжини хвилі (зазвичай УФ) і випромінюють світло більшої довжини хвилі після короткої затримки. Затримка між поглинанням і випромінюванням незначна, зазвичай становить близько наносекунд.
Потім випромінюване світло може бути відфільтровано від світла збудження, щоб виявити розташування флуорофора.
Флуоресцентна мікроскопія використовує більш інтенсивне світло для освітлення зразка. Це світло збуджує флуоресцентний матеріал у зразку, який потім випромінює світло з більшою довжиною хвилі.
Отримане зображення базується на довжині хвилі випромінювання другого джерела світла або флуоресцентної речовини, відмінної від світла, яке спочатку використовувалося для освітлення та збудження зразка.
обробки
Світло на довжині хвилі збудження фокусується на зразку через лінзу об’єктива. Флуоресценція, випромінювана зразком, фокусується на детекторі через лінзу об’єктива. Оскільки більша частина збуджуючого світла проходить через зразок, лише відбите збуджувальне світло досягає об’єктива разом із випромінюваним світлом.
форму
«Флуоресцентна мікроскопія» стосується будь-якого мікроскопа, який використовує флуоресценцію для створення зображень, будь то простіший пристрій, такий як епіфлуоресцентний мікроскоп, або більш складний пристрій, такий як конфокальний мікроскоп, який використовує оптичне розділення для отримання кращої роздільної здатності. Флуоресцентне зображення.
Більшість використовуваних флуоресцентних мікроскопів є епіфлуоресцентними мікроскопами, у яких збудження флуорофорів і виявлення флуоресценції здійснюються через один і той самий оптичний шлях (тобто через лінзу об’єктива).
