Це опташиний мікроскопв якому невеликі світлові відхилення або фазові зсуви виникають під час проникнення світла в незабарвлений зразок. Ці фазові зсуви перетворюються на зображення, тобто коли світло проходить через непрозорий зразок, фазовий зсув освітлює зразок, створюючи освітлене (яскраве) зображення на фоні.
Фазово-контрастна мікроскопія створює висококонтрастні зображення під час роботи з прозорими зразками, тому це особливо вірно для зображень мікробних культур, тонких фрагментів тканин, клітинної тканини та субклітинних частинок.
Принцип роботи фазово-контрастної мікроскопії полягає у використанні оптичних методів для перетворення зразка в амплітудне зображення, яке розглядається через окуляри мікроскопа.
PCM можна використовувати для перегляду незабарвлених клітин (також відомих як фазові об’єкти), що означає, що морфологія клітин зберігається, і клітини можна спостерігати в їхньому природному стані з високою контрастністю та ефективною чіткістю. Це пов’язано з тим, що якщо зразки пофарбувати та зафіксувати, вони вб’ють більшість клітин, а цю особливість не може усунути світлова мікроскопія.
Зміщення, що виникають під час проникнення світла, перетворюються на зміни амплітуди, що спричиняє контраст зображення.
У поєднанні з елементами, що підсилюють контраст (такими як флуоресценція), вони дозволяють краще представити зображення зразків.
Частини фазово-контрастного мікроскопа
Обладнання фазово-контрастного мікроскопа базується на шляху світла від отримання джерела світла до візуалізації зображення.
Отже, його послідовність складається з:
Джерело світла (ртутна дугова лампа)
груповий знімок
діафрагма
конденсатор
Кільцевий конденсатор
зразок
призначення
фотопластина
поляризоване світло
фазове кільце
Особливості фазово-контрастного мікроскопа
Зміни, спричинені відхиленим розсіяним (відхиленим) світлом і невідхиленим світлом, яке досягає зразка, де воно поглинається, виробляються на певній довжині хвилі та створюють колір. Різниця, викликана розсіяним і поглиненим світлом, називається зміною амплітуди. Ці зміни амплітуди є чутливими і тому не можуть бути візуалізовані за допомогою фотографічного обладнання, такого як фазово-контрастна мікроскопія, і тому вони видимі людським оком.
Конденсор фазово-контрастного мікроскопа має непрозорий диск, який називається кільцем, а прозоре кільце створює конус світла, який проходить через зразок. Коли світло змінюється, частина світла на зразку вигинається через зміни оптичної щільності, утворюючи зображення на об’єктиві. Невідхилене світло потрапляє на фазові кільця на фазовій пластині, тоді як відхилене світло пропускає фазові кільця, які проходять безпосередньо через фазову пластину, утворюючи зображення.
Фазово-контрастні мікроскопи розроблені з об’єктивами, які можуть виконувати різноманітні функції, якщо використовувати їх разом із методами підсилення контрасту, такими як флуоресценція. Об’єктив розташований у внутрішній фазовій пластині, яка змінює поглинання світла та фазовий зсув (тобто не дифрагує), створюючи широкий спектр для контрастування зразка та створення сильного контрасту на фоні.
Застосування фазово-контрастної мікроскопії
Визначте морфологію живих клітин, таких як клітини тварин і рослин
Вивчення рухливості та будови руху мікроорганізмів
Виявлення певних мікробних елементів, таких як бактеріальні ендоспори
